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斐林试剂和双缩脲试剂

来源:未知作者:羊绍敬 点击:所属专题: 葡萄糖

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斐林试剂和双缩脲试剂的成分相同,但二者的使用方法及原理不尽相同。斐林试剂和班氏试剂都是检验还原性糖的试剂,二者的使用方法及原理、成分也有区别,下面就从这几种试剂的使用原理、成分及使用方法等方面做一简单总结。 1. 斐林试剂和双缩脲试剂 斐林试剂和双缩脲试

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斐林试剂和双缩脲试剂的成分相同,但二者的使用方法及原理不尽相同。斐林试剂和班氏试剂都是检验还原性糖的试剂,二者的使用方法及原理、成分也有区别,下面就从这几种试剂的使用原理、成分及使用方法等方面做一简单总结。

1. 斐林试剂和双缩脲试剂

斐林试剂和双缩脲试剂都由NaOH溶液和CuSO4溶液组成,但二者有如下三点不同:

(1)溶液浓度不同

斐林试剂中NaOH溶液称为斐林试剂甲,其浓度为0.1g·mL-1,CuSO4溶液称为斐林试剂乙,其浓度为0.05g·mL-1;双缩脲试剂中NaOH溶液(双缩脲试剂A)的浓度为0.1g·mL-1,CuSO4溶液(双缩脲试剂B)的浓度为0.01g·mL-1。

(2)使用原理不同

斐林试剂是新配制的Cu(OH)2溶液,它在加热条件下与醛基反应,被还原成砖红色的Cu2O沉淀,可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)。

鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂,发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的Cu2+与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)结构相似的肽键,所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应,可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。

(3)使用方法不同

斐林试剂使用时,先反NaOH溶液和CuSO4溶液混合(将斐林试剂和双缩脲试剂滴CuSO4溶液滴入2mL NaOH溶液中),而后立即使用:双缩脲试剂使用时,先加入NaOH溶液(2mL),振荡摇匀,造成碱性的反应环境,然后再加入3~4滴CuSO4溶液,振荡摇匀后观察现象。


2. 斐林试剂和班氏试剂

关于斐林试剂和班氏试剂,可用下面的例题引出其异同点:例:你可用什么方法,检验人的尿液中是否含有糖?

答案:

方法一:在试管中加入人的尿液0.1mL,加入班氏糖定性试剂1mL,混合均匀后,将试管放入盛有开水的烧杯中,加热煮沸1min~2min,若试管中溶液在加热后产生了砖红色沉淀,说明尿液中含有糖。

方法二:取少许尿液加水稀释后,加入刚配制好的斐林试剂,沸水浴加热后,若出现砖红色沉淀,则说明尿液中含有糖。

方法三:取少许尿液加水稀释后,加入少许Cu(OH)2悬浊液(新制)加热,若出现砖红色沉淀,则说明尿液中含有糖。

因斐林试剂实质上是新配制的Cu(OH)2溶液,所以方法二与方法三的实质是相同的,只是说法不同而已。

由以上例题可以看出,斐林试剂和班氏试剂都能用于鉴定可溶性还原糖(上题中检验的是葡萄糖)的存在,二者有相同点,也有不同点。

二者的不同点,可以归纳为以下几点:

(1)班氏试剂常用于尿糖的鉴定,其配方与斐林试剂不一样,其配方为:

①400mL 水中加85g 柠檬钠和50g 无水碳酸钠;

②50mL 加热的水中加入8.5g 无水硫酸铜。制成CuSO4溶液;

③把CuSO4溶液倒入柠檬酸钠-Na2CO3溶液中,边加边搅,如产生沉淀可滤去。

(2)其反应原理与斐林试剂略有差别。利用斐林试剂鉴定时,斐林试剂甲和斐林试剂乙直接反应生成Cu(OH)2'Cu(OH)2和可溶性还原糖反应产生砖红色沉淀。而班氏试剂中Cu(OH)2的产生却是这样的:柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐,在水中它们均可水解产生OH,与柠檬酸钠-Na2CO3溶液和CuSO4溶液混合时,Cu2+结合,生成Cu(OH)2'Cu(OH)2与葡萄糖中的醛基反应生成砖红色沉淀。

(3)两种试剂的保存方式不同。斐林试剂甲和斐林试剂乙可强烈产生Cu(OH)2'Cu(OH)2很容易沉淀析出,因此斐林试剂一般为现用现配;而班氏试剂的配方中,柠檬酸钠-Na2CO3为一对缓冲物质,产生的OH数量有限,与CuSO4溶液混合后产生的浓度相对较低,不易析出,因此该试剂可长期保存。

当然,无论用班氏试剂还是斐林试剂,归根结底都是Cu(OH)2与醛基在沸水浴加热条件下反应而生成砖红色的Cu2O沉淀,两者反应现象一样,这就是二者的相同之处。

(责任编辑:化学自习室)
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